[01136233]PI3K-AKT-mTOR介导癫痫海马神经元自噬与凋亡及草果知母汤的效应机制

①课题来源与背景：癫痫的反复发作对患者的智能、意识和运动等功能造成损害,甚至导致死亡。脑神经元异常放电引起反复痫性发作导致神经元大量减少, 最新研究表明神经元自噬和凋亡共同参与此病理过程,且自噬早发于凋亡且起到抗凋亡的效应,促进神经元存活;PI3K-AKT-mTOR信号通路可多途径调控癫痫的发生发展。前期临床证实草果知母汤对癫痫具有良好的临床疗效、具有抗惊厥、抗凋亡作用。草果知母汤可能通过调控mTOR信号通路而抗癫痫作用。 ②研究目的与意义：探讨草果知母汤通过mTOR信号通路而调控癫痫神经元自噬与凋亡的作用及机制,为草果知母汤抗癫痫神经元损伤提供科学依据。 ③主要论点与论据： 主要论点：1)明确胶质瘤增殖等细胞功能的异常诱导神经元凋亡与胶质瘤癫痫相关;2)阐明黄芩苷通过抗胶质瘤细胞增殖,抑制神经元凋亡兼具抗胶质瘤-癫痫;3)阐明黄芩苷通过 miR-1296 调控其靶基因 TMED7 和 SH3GLB1 抗胶质瘤细胞增殖,抑制神经元凋亡兼具抗胶质瘤-癫痫的作用。 依据：研究方法：戊四氮（PTZ）点燃法建立慢性癫痫大鼠模型;正常组和慢性癫痫模型对照组给予双蒸水灌胃 2 mL/kg/天;中药草果知母汤给药组： 低剂量组给药1.25g/kg,中剂量组给药 2.5g/kg,高剂量组以5g/kg给药。正常、模型对照及中药给药每天1次,持续5周。西药组对照组每天给予丙戊酸钠缓释片（商品名：德巴金）混悬液 1mg/kg灌胃,每日 2 次,按时间点灌胃,持续5周。给药结束后取海马组织：HE、Nissl 染色检测海马神经元损伤程度;电镜观察自噬体;qRT-PCR、Western Blot检测 β-actin、PI3K、Akt、mTOR、mTORC1、S6K、4EBP1、TFEB、Bcl-2、Beclin1、LC3 mRNA和蛋白;免疫组化检测PI3K、Akt、mTOR、mTORC1、S6K、p70S6k、4EBP1、p4EBP1、TFEB、bcl-2、Beclin1、LC3 蛋白表达;免疫共沉淀检测 Beclin1 与 Bcl-2 相互作用。研究结果：草果知母汤可改善癫痫模型动物海马神经元损伤;促进Bcl-2、 Beclin1、 p70S6k和S6K表达,抑制mTOR、PI3K、4EBP1、TFEB和LC3表达来调控PI3K-AKT-mTOR 信号通路,促进癫痫模型的早期自噬,抑制晚期自噬,抑制凋亡,起到抗癫痫作用。研究结论：早期的自噬可能为Beclin1依赖性的,且起到抗凋亡作用;晚期的自噬与LC3相关,与凋亡具有协同作用。草果知母汤可通过调控PI3K-AKT-mTOR 信号通路调控自噬,抑制凋亡,起到抗癫痫作用。 ④创见与创新：1)对胶质瘤增殖等的异常诱导神经元凋亡与胶质瘤癫痫相关性进行研究;2)对黄芩苷兼具抗癫痫与抗胶质瘤进行体外细胞及体内动物水平的研究;3)对黄芩苷抗胶质瘤-癫痫的可能机制：通过 miR-1296 调控其靶基因TMED7 和 SH3GLB1 进行探索性的研究,将中药单体治疗和 miRNA 治疗相结合,为胶质瘤-癫痫的干预治疗策略的开拓提供数据支持。 ⑤社会经济效益：在体外细胞——星形胶质（瘤）细胞与神经元共培养体系和体内——大鼠原位胶质瘤诱导癫痫模型对黄芩苷抑制神经元凋亡来抗癫痫的作用进行探索性研究,为癫痫的干预及患者生活质量的提高策略提供新的切入点。存在的问题：无。 ⑥历年获奖情况：无。