[01300443]壮药白花香莲解毒方对慢性乙型肝炎DC-CTL免疫应答调控机制研究

1、课题来源与背景; 本课题来源于广西自然科学青年基金。抗病毒是慢性乙型肝炎（CHB）治疗的关键性环节,核苷（酸）类似物和干扰素是目前公认的两类抗乙肝病毒（HBV）药物,各有优势,但均不能彻底清除HBV。因此,在深入研究HBV和宿主相互关系的基础上,寻找更有效、更安全的治疗药物/方法仍是当前国内、外研究的热点。白花香莲解毒方是项目组通过民间走访收集整理单方、验方后,在壮医理论及“主药、公药、母药、帮药、引药”的壮药复方配伍原则指导下,凝练成的用于慢性乙型肝炎治疗的特色方药,由白花蛇舌草30g、黄花倒水莲15g、三叶香茶菜20g、排钱草15g共4味壮药组成,其中白花蛇舌草为主药、母药,属解毒药,功效是清热解毒,调阳证;黄花倒水莲为公药,属补虚药,功效是益气补虚,调阴证;三叶香茶菜为母药,属解毒药,功效是解毒活血,配合主药增强祛邪排毒的作用,调阳证;排钱草为帮药、引药,属调气药。诸药合用共同发挥攻毒补虚,疏三道,通两路,调三气,平阴阳之效。前期多中心临床研究证实,白花香莲解毒方联合阿德福韦酯胶囊治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者48周,其HBVDNA阴转率提高24.31%,HBeAg/HBeAb血清学应答率提高10.77%,生化学应答率提高7.8%,并能恢复患者的免疫功能,改善患者生存质量,临床综合疗效优于单纯阿德福韦酯对照组（P＜0.05）。但白花香莲解毒方抑制HBV复制与表达的作用机制尚未明确。 最新研究发现CHB患者肝脏HBV持续复制,与机体的特异性CD8+T淋巴细胞（CTL）免疫功能低下,树突状细胞（DC）功能受损,致免疫调节功能紊乱有关。微小核糖核酸（miRNA）是一种非编码的小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,是一种新发现的宿主肝细胞与乙型肝炎病毒（HBV）相互作用的分子机制,miRNA能调控机体的免疫细胞分化与成熟。因此本课题通过观察白花香莲解毒方治疗HBeAg阳性的CHB患者前后CTL、DC及miRNA表达图谱的变化,以明确壮药白花香莲解毒方“解毒补虚”抗HBV的干预效应与作用靶点,对促进壮医药的发展具有重要意义。 2、研究目的与意义; 通过对比观察壮药白花香莲解毒方对HBeA 阳性慢性乙型肝炎外周血的DC、 CTL 等免疫细胞分化、表型及功能的影响,并构建体外细胞HBV1.3P-HepG2表达模型,筛选出miRNA差异性表达图谱,从而揭示白花香莲解毒方免疫调控,抗HBV 的分子机制,其对促进壮医“毒虚致病”理论完善及创新性药物研发具有重要的意义。 3、主要论点与论据; 恢复慢性乙型肝炎患者免疫功能,实现免疫重构,以获得长期免疫应答被认为是征服该病最有希望的突破口之一。树突状细胞（Dendritic cells, DC）提呈的细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocyte ,CTL）适应性免疫应答不佳可能是导致CHB免疫缺陷、免疫耐受的核心机制。前期临床研究发现,白花香莲解毒方联合阿德福韦酯胶囊治疗能提高抗HBV的综合疗效,恢复免疫功能,但具体的免疫调控机制尚未明确。 研究表明,病毒与宿主在miRNA转录后水平上相互作用是一个广泛的现象。宿主编码的miRNA能在转录后水平调控靶基因的表达,调控机体的免疫细胞分化与成熟,同时miRNA还能够通过直接和（或）间接的途径调控HBV转录,影响其复制与表达,抑制甚至清除HBV;HBV则可通过影响宿主miRNA或自身编码miRNA,调控宿主的基因表达,以利于HBV感染与存活。miRNA在宿主与HBV相互作用中形成一个复杂的调控网络,相互竞争调控的结果,决定了HBV转录复制的活性及疾病发展的趋势。 4、创见与创新; 肝细胞在抑制/清除HBV的重要作用一直被忽视。宿主microRNA-免疫信号通路调控网络机制在抗病毒中发挥重要作用。但对于肝细胞内有哪些microRNA、免疫信号通路参与拮抗HBV复制过程？microRNA是通过何种途径调控这些免疫信号通路发挥抗HBV作用？被激活后的免疫信号通路与microRNA彼此间又是如何协同发挥其肝细胞内的抗HBV作用？尚知之甚少。本项目将在前期研究基础上,将首次从肝细胞内源性microRNA-免疫信号通路（DC/CTL）调控网络的机制切入研究,探寻CHB新的治疗靶点,具有较强的创新性。 5、社会经济效益,存在的问题; 本项目为应用基础研究,虽未产生直接的经济效益,但研究成果已证实壮药白花香莲解毒方具有一定抗HBV的疗效作用,并发现了其部分疗效机制,为后续该方的深度研发及临床应用奠定良好的基础。 本项目由于经费及时间的限制,对新发现的与白花香莲解毒方抗HBV相关的差异性miRNA表达图谱的功能验证尚未展开。 6、历年获奖情况; [1]2013年“抗乙型肝炎病毒壮药材筛选及应用（2013-J-1-005-11）”荣获广西科学技术进步奖一等奖,课题成员：朱华、庞宇舟、傅鹏、林江、张可锋、滕建北、秦祖杰、王孝勋、王勤、高雅、邱华、黄海滨。 7、成果简介要向社会公开,请不要填写商业秘密内容。 本课题已发表论文5 篇,其中SCI 收录1 篇,中文核心期刊2 篇,科技核心2篇;获国家专利授权1 项,2013年获广西科技进步奖1 项。课题负责人2016年上海中医药大学博士毕业,博士论文“白花香莲解毒方抑制HBV的miRNA/mRNA表达谱筛选及功能验证”,已标注来源于本课题资助,另培养硕士2 人。