技术详细介绍
1、课题来源与背景 1)课题来源 本课题来自由吉林省科技厅资助的吉林省医药产业发展专项资金计划,项目编号为20130727038YY。项目总投资90万元,其中省级财政资助金额为40万元,自筹资金50万元。运行时间为2013年7月至2016年6月。 2)研究背景 我国是出生缺陷高发国家之一,每年约有80万名至120万名出生缺陷儿出生。产前诊断的发展目标是使越来越多的遗传性疾病及先天性缺陷在胚胎发育的不同时期就能够被准确、早期及安全的检测出来。目前,产前诊断常规使用的技术如羊膜腔穿刺,绒毛膜活检等有创检查,有导致流产、宫内感染等风险,不易推广。近年来孕妇外周血中胎儿细胞与游离胎儿DNA的发现为无创性产前诊断带来了机遇。但由于外周血内胎儿细胞与DNA的含量稀少,其含量远不能满足临床诊断的需要,因此需要开发出一种高效、特异地从孕妇外周血中富集、分离胎儿细胞以及DNA,对多种染色体疾病或单基因遗传病进行同步筛查的无创先进产前诊断技术,以满足无创产前诊断的技术需要。 2、研究目的与意义: 本课题研究目的是建立从孕妇外周血血浆中高效、特异性分离出胎儿细胞以及富集胎儿游离DNA与扩增的技术方法,以分离的胎儿细胞与DNA为研究对象,进行染色体倍体疾病诊断标志物的筛查,根据这些分子标志物应用实时定量PCR技术进行21,18,13,X,Y 染色体倍体疾病筛查。通过该课题研究建立一种具有我国自主知识产权的无创产前诊断技术。 3、主要论点与论据: 本项目通过5年的攻关研究(包括前期研究)取得如下研究成果: 1)该项目成果获得国际级发明专利1项,申请国家级发明专利2项。 (1)张桂珍,杨麒巍,杜珍武,宋旸,于杉。一种选择性扩增孕妇血浆中游离DNA的方法,中国,专利号:ZL201410468117.2 (2)张桂珍,杨麒巍,杜珍武,宋旸,于杉。 一种选择性整体扩增不同长度DNA片段的方法, 中国, 申请号:201410365311.8。 (3) 杨麒巍,张桂珍,杜珍武,宋旸,于杉。一种扩增游离DNA的方法,中国,申请号:201410468186.3。 2)研发实验用孕妇外周血血浆游离DNA提取试剂盒1个。 3)建立新技术3项 (1) 建立体外有效分离孕妇外周血游离DNA方法 (2) 建立体外选择性特异性扩增不同片段大小DNA的技术 (3) 建立基于孕妇外周血胎儿细胞与游离DNA为检材的荧光定量PCR进行21三体综合症体筛查技术体系 4)发表论著19篇,其中SCI 11篇。 5)培养博士研究生4名,中青年骨干研究人员4名。 4、创见与创新: 1)成功建立了在保留孕妇外周血CffDNA片段完整性的基础上,选择性扩增孕妇血浆中CffDNA的专利技术,实现了在富集CffDNA的同时进行大量扩增, 显著降低母体血浆中大片段游离DNA背景干扰,攻克了半个世纪以来困扰无创产前诊断领域检材稀少、难以获取的技术瓶颈,为应用孕妇血浆CffDNA进行600余种染色体疾病、3000余种单基因病诊断提供了专利技术支撑。 2)以CffDNA特异性扩增为基础, 应用改进的扩增片段长度多态性(AFLP)技术以及荧光定量PCR技术,建立了一种灵敏度及特异性高、早期诊断且简便易行的21—三体综合征无创产前诊断技术,为多种染色体倍体疾病以及单基因遗传病的筛查等无创产前检测奠定了关键技术基础。 3)在国内外率先建立了免疫纳米磁探针特异性富集孕妇外周血胎儿有核红细胞、免疫纳米晶探针特异性鉴定胎儿有核红细胞的技术。建立了基于孕妇外周血稀少胎儿有核红细胞痕量基因组DNA提取即扩整技术基础上的21三体综合症的无创产前诊断技术。 5、社会经济效益,存在的问题: 1)社会经济效益 本项目的最终成果为具有我国自主知识产权、居于国际领先水平的无创产前诊断系列新技术。不仅适用于大城市大医院,更易于在基层医疗、保健机构推广应用。本项目科研成果所带来的创新技术和产品彻底打破目前我国出生缺陷筛检传统技术和试剂主要依赖进口的被动局面,为落实发展高科技新兴产业,加速我国经济结构优化发挥有力的科技支撑。 2)存在问题 (1)病例组样本量较小,群体代表性有限,仍需进一步的实验深入研究。(2)所建立的方法仍需在扩大的样本进一步进行特异性及灵敏度检验。(3)争取后续产业化研发资金,研发多个无创产前诊断试剂产品。
1、课题来源与背景 1)课题来源 本课题来自由吉林省科技厅资助的吉林省医药产业发展专项资金计划,项目编号为20130727038YY。项目总投资90万元,其中省级财政资助金额为40万元,自筹资金50万元。运行时间为2013年7月至2016年6月。 2)研究背景 我国是出生缺陷高发国家之一,每年约有80万名至120万名出生缺陷儿出生。产前诊断的发展目标是使越来越多的遗传性疾病及先天性缺陷在胚胎发育的不同时期就能够被准确、早期及安全的检测出来。目前,产前诊断常规使用的技术如羊膜腔穿刺,绒毛膜活检等有创检查,有导致流产、宫内感染等风险,不易推广。近年来孕妇外周血中胎儿细胞与游离胎儿DNA的发现为无创性产前诊断带来了机遇。但由于外周血内胎儿细胞与DNA的含量稀少,其含量远不能满足临床诊断的需要,因此需要开发出一种高效、特异地从孕妇外周血中富集、分离胎儿细胞以及DNA,对多种染色体疾病或单基因遗传病进行同步筛查的无创先进产前诊断技术,以满足无创产前诊断的技术需要。 2、研究目的与意义: 本课题研究目的是建立从孕妇外周血血浆中高效、特异性分离出胎儿细胞以及富集胎儿游离DNA与扩增的技术方法,以分离的胎儿细胞与DNA为研究对象,进行染色体倍体疾病诊断标志物的筛查,根据这些分子标志物应用实时定量PCR技术进行21,18,13,X,Y 染色体倍体疾病筛查。通过该课题研究建立一种具有我国自主知识产权的无创产前诊断技术。 3、主要论点与论据: 本项目通过5年的攻关研究(包括前期研究)取得如下研究成果: 1)该项目成果获得国际级发明专利1项,申请国家级发明专利2项。 (1)张桂珍,杨麒巍,杜珍武,宋旸,于杉。一种选择性扩增孕妇血浆中游离DNA的方法,中国,专利号:ZL201410468117.2 (2)张桂珍,杨麒巍,杜珍武,宋旸,于杉。 一种选择性整体扩增不同长度DNA片段的方法, 中国, 申请号:201410365311.8。 (3) 杨麒巍,张桂珍,杜珍武,宋旸,于杉。一种扩增游离DNA的方法,中国,申请号:201410468186.3。 2)研发实验用孕妇外周血血浆游离DNA提取试剂盒1个。 3)建立新技术3项 (1) 建立体外有效分离孕妇外周血游离DNA方法 (2) 建立体外选择性特异性扩增不同片段大小DNA的技术 (3) 建立基于孕妇外周血胎儿细胞与游离DNA为检材的荧光定量PCR进行21三体综合症体筛查技术体系 4)发表论著19篇,其中SCI 11篇。 5)培养博士研究生4名,中青年骨干研究人员4名。 4、创见与创新: 1)成功建立了在保留孕妇外周血CffDNA片段完整性的基础上,选择性扩增孕妇血浆中CffDNA的专利技术,实现了在富集CffDNA的同时进行大量扩增, 显著降低母体血浆中大片段游离DNA背景干扰,攻克了半个世纪以来困扰无创产前诊断领域检材稀少、难以获取的技术瓶颈,为应用孕妇血浆CffDNA进行600余种染色体疾病、3000余种单基因病诊断提供了专利技术支撑。 2)以CffDNA特异性扩增为基础, 应用改进的扩增片段长度多态性(AFLP)技术以及荧光定量PCR技术,建立了一种灵敏度及特异性高、早期诊断且简便易行的21—三体综合征无创产前诊断技术,为多种染色体倍体疾病以及单基因遗传病的筛查等无创产前检测奠定了关键技术基础。 3)在国内外率先建立了免疫纳米磁探针特异性富集孕妇外周血胎儿有核红细胞、免疫纳米晶探针特异性鉴定胎儿有核红细胞的技术。建立了基于孕妇外周血稀少胎儿有核红细胞痕量基因组DNA提取即扩整技术基础上的21三体综合症的无创产前诊断技术。 5、社会经济效益,存在的问题: 1)社会经济效益 本项目的最终成果为具有我国自主知识产权、居于国际领先水平的无创产前诊断系列新技术。不仅适用于大城市大医院,更易于在基层医疗、保健机构推广应用。本项目科研成果所带来的创新技术和产品彻底打破目前我国出生缺陷筛检传统技术和试剂主要依赖进口的被动局面,为落实发展高科技新兴产业,加速我国经济结构优化发挥有力的科技支撑。 2)存在问题 (1)病例组样本量较小,群体代表性有限,仍需进一步的实验深入研究。(2)所建立的方法仍需在扩大的样本进一步进行特异性及灵敏度检验。(3)争取后续产业化研发资金,研发多个无创产前诊断试剂产品。