[01343884]委陵菜积雪草酸对非酒精性脂肪肝内质网应激与肝细胞脂代谢的作用和机制的研究

近几十年来,随着高脂血症、2 型糖尿病、肥胖症等一系列代谢综合征发病率在全球日益增高,与他们关系密切的非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）引起了人们的重视。NAFLD 作为代谢异常早期表现与肥胖、糖尿病等代谢疾病互为因果关系,是慢性肝病的首要病因。在研究慢性肝炎、肝损伤治疗方面,我们科研团队开展了大量的中草药及其活性成分的筛选研究工作。我们前期研究发现中药委陵菜及其活性成分对非酒精性脂肪肝有良好的改善作用,具有非常好的研究和开发前景。以往的研究表明,积雪草酸具有抗炎、抗肿瘤、神经保护等多种药理作用。引人关注的是,积雪草酸还是一个护肝剂,在肝细胞和枯否氏细胞培养实验以及 D-半乳糖和脂多糖诱导的小鼠模型的动物实验中均表明,积雪草酸可通过抗线粒体应激和抗氧化作用对肝损伤起到保护作用。我们前期对委陵菜积雪草酸（AAPC）进行护肝实验：大鼠灌胃给予乙醇12周造成酒精性肝损伤,治疗组灌胃给予委陵菜积雪草酸进行治疗,结果发现委陵菜积雪草酸对酒精诱导的大鼠肝损伤有保护作用,其机制与减轻氧应激、减少TLR4、CD14和MyD88表达及抑制 Kupffer 细胞激活有关,同时,在肝脏病理组织学检查中,观察到模型组大鼠肝脏肝纤维化病变明显,我们意外发现,模型组中大鼠肝组织中还出现了脂肪堆积,而委陵菜积雪草酸治疗组中,脂肪浸润减轻。上述研究成果已发表在《Biol. Pharm. Bull.》上。考虑到肝脂肪病变先于肝纤维化之前发生,委陵菜积雪草酸对脂肪肝是否有作用？由此,促发我们深入研究委陵菜积雪草酸对脂肪肝的干预作用。我们近期的试验发现,委陵菜积雪草酸对油酸（单不饱和脂肪酸）诱导L02 细胞脂质沉积有明显抑制作用,然而,其对 NAFLD 保护作用机制仍不清楚。最近,有学者提出解释 NAFLD 发病机制的新概念,即“多重平行打击”假说。作者认为内质网应激和细胞因子介导的应激反应都会引起肝细胞脂肪变性和坏死,是多重因素共同行动促进了 NAFLD 的发展。脂肪肝是肝脏面对应激的早期适应性反应,而不是在疾病进展中第一次打击的后果。所有这些都指出：内质网应激在 NAFLD 的发生发展中扮演着重要的角色。基于内质网应激的调节来研究 NAFLD 发病机制及靶向药物治疗已成为目前研究的一个热点。总之,为了深入了解委陵菜积雪草酸抗非酒精性脂肪肝的作用机制,我们拟在前期研究工作的基础上,以肝细胞脂代谢为靶向、ERS 为切入点,从多层次、多角度对委陵菜积雪草酸抗非酒精性脂肪肝进行深入探讨,为其治疗非酒精性脂肪肝提供实验依据和理论支持。 本项目研究结果显示了AAPC对大鼠非酒精性脂肪肝具有保护作用,同时明确了其作用机制与AAPC抑制ERS信号通路、调控脂肪生成相关蛋白表达有关,显示了AAPC作为防治非酒精性脂肪肝的有潜力药物。但临床前的其它试验研究需要后续补充,作为新药进一步研究开发。为了AAPC能进入临床试验,需要补全临床前研究资料,申请临床试验批件,进一步开发该药物。 本项目探讨了AAPC对肝细胞脂代谢的影响及其调控作用的影响及其机制。我们发现AAPC能有效缓解肝脏脂肪变性和肝细胞损伤,这可能与AAPC能够减轻氧化应激、提升抗氧化防御系统、抑制 NF-кB 通路相关蛋白表达,从而降低炎症因子有关。此外,AAPC还通过抑制 ERS 信号通路与调控脂肪生成相关蛋白表达,从而减轻肝细胞凋亡和脂质代谢紊乱。其次,本项目还探讨了委陵菜积雪草酸抗急性肝损伤的作用及其机制。发现AAPC能减轻 LPS/D-GalN 诱导的小鼠急性肝损伤,其可能的机制是：①AAPC 能够抑制ERS信号通路相关蛋白,减轻内质网应激的反应从而减轻肝细胞的损伤和凋亡;②AAPC 还能通过促进肝细胞自噬,加速内质网恢复稳态从而促进肝细胞存活和抵御外界不良刺激。以上研究结果表明,AAPC 可能作为一种治疗 NAFLD 和预防急性肝损伤的新型天然潜力药物。本项目结题时申请了 2 项发明专利、发表 2 篇 SCI 论文、发表 2 篇中文核心,培养3名研究生。