[01349780]传染性法氏囊病病毒重组融合蛋白VP2-VP1及其制备方法和应用

①课题来源与背景 传染性法氏囊病（infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病（infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种危害青年鸡的急性、高度接触性的传染病。IBDV主要侵害鸡的淋巴组织,特别是中枢免疫器官法氏囊,病毒在其中的增殖会造成B淋巴细胞的衰竭,从而引起鸡的免疫抑制,特别是雏鸡的早期感染会引发十分严重的,而且是长期的免疫抑制。研究表明,传染性法氏囊病常与其他禽类疾病混合感染,这使得养禽业疫病情况更加复杂和严重。如何及时有效地掌握IBDV的流行情况,并对此制定有效的防控措施显得至关重要。 ②技术原理及性能指标 基于IBDV基因组A节段的VP2蛋白和基因组B节段的VP1蛋白,发明人通过对基因组两个节段的两个蛋白进行融合表达,设计制备了一种传染性法氏囊病病毒重组融合蛋白VP2-VP1,由VP1和VP2基因串联而成的VP2-VP1融合基因所编码。试验显示,本发明构建的重组表达载体pVP2-VP1,能够在重组大肠杆菌中稳定表达重组融合蛋白VP2-VP1,Western-blot证实该蛋白具有良好的抗原性。据此,发明人用所表达的重组融合蛋白VP2-VP1作为抗原,建立了ELISA检测方法和试剂盒,应用该法进行IBDV抗体的间接ELISA检测,有助于更好地应用于临床IBDV感染后鸡群抗体水平的检测。而试剂盒试用表明其具有敏感、特异、稳定性和重复性良好等优点。 ③技术的创造性与先进性 本发明首次将IBDV VP2蛋白和VP1蛋白的串联融合表达作为抗原进行IBDV抗体的检测。选用的VP2蛋白是IBDV主要的宿主保护性抗原,与病毒的毒力相关,而VP1蛋白也能影响病毒的毒力,以串联VP2-VP1蛋白作为诊断抗原,能够简便、快速、准确的检测IBDV抗体,本发明构建了表达重组融合蛋白VP2-VP1的重组表达载体,并将其表达的重组融合蛋白VP2-VP1用于建立IBDV抗体ELISA检测方法。 ④技术的成熟程度,试用范围和安全性 融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法,利用融合蛋白技术,可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白,融合基因可在原核细胞也可在真核细胞中进行表达,适用范围广,安全性高。 ⑤应用情况及存在的问题 有待进一步与企业合作,将其开发为商品化的IBDV抗体检测试剂盒,在全国范围内推广使用。 ⑥历年获奖情况 无。