[01363866]益气活血法对急性心肌梗死大鼠外周循环内皮祖细胞集落数目和功能的影响及机制探讨

①课题来源与背景 冠状动脉粥样硬化可以造成内皮的损伤,重新的内皮化修复则类似于一种创伤后的愈合过程,而中医药对于创伤的治疗有着丰富的理论和经验。中医药的优势可能在于能够从多个环节、多个层次对创伤修复进行调节和干预,从而发挥更好的疗效。中医认为创伤的主要病机之一是气行无力,血行瘀滞。创伤的修复与气血盛衰有极大的关系,气虚血瘀则创面愈合不良,应用内托之法则可以起到促进修复愈合的效果,而且益气活血法亦被认为是AMI治疗中核心治法。有很多的实验和临床研究证明益气活血法对改善内皮功能障碍具有一定优势。陈利国等予大鼠高脂饲料建立血瘀证动物模型,造模组与对照组比较血清钙及胞内游离钙浓度均明显升高,益气活血复方具有钙通道阻滞剂样作用,能使造模动物血管内皮细胞内游离钙浓度降低,认为血瘀证的形成可能与血管内皮细胞的屏障功能下降有关,益气活血复方能降低胞内游离钙浓度,具有血管内皮保护作用。马华等采用血清药理学方法,制备成芪红合剂低、中、高剂量含药血清,用密度梯度离心法分离获得EPCs,观察芪红合剂含药血清对人外周EPCs数量及其功能的影响,结果显示,芪红合剂含药血清能增加EPCs的数量,且能改善EPCs黏附能力,提高EPCs一氧化氮合酶活性,促进NO分泌。不过,目前尚缺乏对此理论进行系统深入的临床和实验研究。 ②研究目的与意义 基于益气活血中药在改善改善内皮祖细胞的数量和功能方面的良好前景,我们拟采用益气活血的经典方剂——补阳还五汤对AMI大鼠进行干预,并与阿托伐他汀钙对比,运用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞,M199培养基培养成内皮祖细胞并行Dil-acLDL和FITC-UEA-1双标鉴定,采用CCK-8法、改良的Boyden小室和粘附能力测定实验分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力和粘附能力。以期为益气活血法保护AMI患者血管内皮功能提供循证依据,从细胞水平研究该法对EPCs数量和功能的作用,并进一步从分子水平研究该法对EPCs凋亡的影响及其信号转导途径,探讨其作用机制,也为寻找改善内皮祖细胞的数量和功能的有效药物做出有益的探索。 ③主要论点与论据 ①通过实验的研究结果可以看到,提示补阳还五汤联合他汀类药物较单纯的中药或西药治疗可更好的改善AMI大鼠的内皮功能,为益气活血法改善EPCs功能提供了实验依据,为改善心肌梗死内皮功能障碍做出了有益的探索。 ②机制部分研究显示,补阳还五汤含药血清可减轻H2O2引起的EPCs细胞凋亡,维持氧化应激状态下的PI3K/Akt通路mRNA表达水平、蛋白表达及蛋白磷酸化水平,而这种作用可以被PI3K/Akt通路抑制剂大部分抑制,在蛋白表达及磷酸化部分抑制剂不能完全抑制中药含药血清的作用,提示补阳还五汤干预氧化应激可能存在除PI3K/Akt通路以外的途径,值得进一步的研究。 ④创见与创新 补阳还五汤联合他汀类药物较单纯的中药或西药治疗可更好的改善AMI大鼠的内皮功能;补阳还五汤干预氧化应激可能存在除PI3K/Akt通路以外的途径,值得进一步的研究。 ⑤社会经济效益,存在的问题 本研究结果显示,补阳还五汤联合他汀类药物较单纯的中药或西药治疗可更好的改善AMI大鼠的内皮功能,减轻氧化应激引起的EPCs细胞凋亡,中西医结合组这种作用出现的更早,而这种作用可以被PI3K/Akt通路抑制剂所抑制。补阳还五汤含药血清可维持氧化应激状态下的PI3K/Akt通路mRNA表达水平、蛋白表达及蛋白磷酸化水平,而这种作用可以被PI3K/Akt通路抑制剂大部分抑制,在蛋白表达及磷酸化部分抑制剂不能完全抑制中药含药血清的作用,提示补阳还五汤干预氧化应激可能存在除PI3K/Akt通路以外的途径,值得进一步的研究。研究为改善急性心肌梗死患者内皮功能障碍提供了新的思路,但仍需进一步的在体实验研究及结合大样本临床研究进一步探索和验证。 ⑥历年获奖情况 2017年获得中国中医药研究促进会科学技术进步奖三等奖一项。 ⑦成果简介 已发表相关论文4篇,其中1篇为网络优先发表。 [1]温志浩,卢健棋,潘朝锌,何新兵,王庆高,黄明剑,彭志林,庞延,周宇桢,黄舒培.益气活血通阳法不同配比对急性心肌梗死兔血管生成因子影响的研究[J].现代中西医结合杂志,2019,28（34）:3768-3772+3806。 [2]卢健棋,温志浩,沈瑜,潘朝锌,王庆高,何新兵,吴海珊,黄明剑,彭志林,周宇祯.补阳还五汤对急性心肌梗死PCI术后病人外周血液单个核细胞血管内皮生长因子的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2018,16（20）:2921-2924。 [3]温志浩,卢健棋,沈瑜,潘朝锌,王庆高,何新兵,杨清华,梁逸强,彭志林,周宇祯.补阳还五汤对急性ST段抬高型心肌梗死患者介入术后血浆脂联素影响的研究[J].辽宁中医杂志,2018,45（04）:747-749。 温志浩,黄德庆,黄明剑,潘朝锌,王庆高,梁逸强,庞延,曹亚平,李倩宇.补阳还五汤含药血清对急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究[J/OL].海南医学院报:1-14[2021-05-28].https://doi.org/10.13210/j.cnki.jhmu.20210303.006。