[01419654]应用iTRAQ技术筛选激素性股骨头坏死筋脉瘀滞证患者的血清蛋白质组学研究

一、课题来源与背景：本项目来源于广西自然科学基金委的面上项目。激素性股骨头坏死（Steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH）是使用糖皮质激素治疗后的重要并发症,尚无早期诊断的特异性标志物。中医药防治早期SONFH具有优势和特色,但缺乏对证本质的研究。基于遗传易感性的假说,我们开展了中医辨证分型与SONFH易感基因的关联研究。然而,SONFH发病机制复杂,仅定位易感基因是不够的,随着蛋白质组学研究的兴起,为SONFH中医证候研究提供了新思路。本项目以SONFH筋脉瘀滞证患者为研究对象,以肝肾亏虚证患者为对照,运用iTRAQ结合质谱鉴定的新技术,寻找SONFH筋脉瘀滞证患者外周血清差异表达蛋白并在血清和股骨头组织中进行验证。二、研究目的与意义： 1、初步探索 SONFH 筋脉瘀滞证的蛋白质组学规律,阐明其病机形成的分子机制,发现早期诊断的生物标志物,为中医临床辩识本病提供可供参考的客观化指标。三、主要论点与论据： 1、通过高通量蛋白质组学析,在使用GC无坏死组（SN）,筋脉瘀滞组 （SGS）, 肝肾亏虚（SJM）,创伤性（ONFH）组别中一共得到了66个差异表达蛋白（表达变化在1.2倍以上）,其中,与正常对照组相比,SN组别中差异表达蛋白18个;与正常对照组相比,SGS组别中差异表达蛋白20个;与正常对照组相比,SJM组别中差异表达蛋白31个;与正常对照组相比ONFH组别中差异表达蛋白15个。 2、SGS 组与 SJM 组相比较共筛选出 26 个差异蛋白,其中上调的有 14 个,下调的有 12 个（P＜0.05）,8 个表达差异倍数在两倍以上（IGHV3-7、IGHV1OR15-1、CLEC3B、ABCB9、FGB、F13A1、FGG、FGA）。SJM 组与 SGS 组相比较共筛选出 15 个差异蛋白,上调的有 13 个,下调的有 1 个,3 个表达差异倍数在两倍以上（SAA1、ACTB、CRP）。 3、通过高通量蛋白质组学析,我们认为 ①IGHV3-7、IGHV1OR15-1、CLEC3B、ABCB9、FGB、F13A1、FGG、IGHV3-7、IGHV1OR15-1、CLEC3B、ABCB9、FGB、F13A1、FGG、FGA 可能是 SLE 合并 SONFH 筋脉瘀滞证潜在的血清特异性蛋白标志物。②CRP、AAG、CFP、DBH、SAA1 可能是 SLE 合并 SONFH 潜在的血清特异性蛋白标志物。③SAA1、ACTB、CRP 可能是 SLE 合并 SONFH 肝肾亏虚证潜在的血清特异性蛋白标志物。 四、创见与创新 1.技术创新：首次应用iTRAQ技术结合质谱鉴定筛选SONFH患者血清差异蛋白质,寻找SONFH早期诊断的分子生物标记物,阐明 SONFH 发生的分子机制,有望在 SONFH 早期诊断、治疗方案选择、新型药物筛选和预防上取得突破。 2.方法创新：将传统中医学与现代医学先进的蛋白质组学研究相结合,探索 SONFH 筋脉瘀滞证形成的差异表达蛋白,阐明 SONFH 中医筋脉瘀滞证的分子机制,为中医辩证施治的研究提供了新的方法和思路,对促进中医药现代化具有重要的意义。五．社会经济效益,存在的问题本项目中的总工作难点①去除血清高丰度蛋白并保留低丰度蛋白是血清蛋白质组学研究的关键环节。对于血清高分度蛋白的去除,目前有乙腈法、乙醇法、丙酮沉淀法等低成本方法,但结果并不理想,且对血清差异蛋白质图谱造成一定影响,在反复的实验摸索中,我们已在实验技术上取得相应提高。今后我们会在现阶段的研究结果中更深一步的阐述激素性股骨头坏死的机制。六、历年获奖情况 1、发表中文核心期刊论文6篇。该6篇文章是作者从血清差异蛋白为切入点,通过高通量蛋白质组学析,比较使用GC无坏死组（SN）,筋脉瘀滞组 （SGS）, 肝肾亏虚（SJM）,创伤性（ONFH）这4组与正常组的变化,得出差异蛋白进行分析。从分子学水平式阐述SONFH的发病机制,为中医辩证施治的研究提供了新的方法和思路,对促进中医药现代化具有重要的意义。