[01427340]鳖甲煎丸干预干细胞巢调控Notch通路治疗肝纤维化的研究

一、课题来源及背景肝硬化是临床常见病、多发病,其年发病率为17/10 万,已对国民经济发展和人们健康造成了重大影响。目前国内外对肝硬化缺乏有效的防治措施,而肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程,防治肝纤维化是攻克肝硬化的突破口。在我国,以乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染所致的肝硬化较为常见。传统观念认为肝硬化是不能逆转的,但是最近动物实验研究和临床观察的证据表明肝纤维化仍然是可以逆转的,但相当困难。BMSCs 是一个多潜能分化的细胞,在体外加入诱导剂培养,可以分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、肝样细胞等。当BMSCs 进入到损伤肝脏后,通过转分化为肝样细胞、 与肝细胞融合或者分泌细胞因子等机制,促进肝脏的恢复,改善肝脏的功能,阻断肝纤维化发生。干细胞在一定条件下可以分化为肝样细胞,从而在一定程度上可以逆转和延缓肝纤维化并补充纤维化过程中损伤的肝细胞,但其效果与其移植后的生存及转化息息相关,在中医理论指导下,通过经方对MSCs 增殖及分化的作用研究,对从细胞分子水平上阐明中医药在MSCs 增殖及各向分化的作用机制。本研究基于Notch 信号通路及微环境（干细胞巢）探讨中药对干细胞的作用,从分子水平及细胞生物领域去探讨中医药对干细胞的作用机制,是研究思路的创新。 二、研究目的与意义 肝纤维化发病率高,目前无逆转肝纤维化的理想方法。骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种具有多潜能分化的细胞,在一定条件下可分化为肝样细胞,从而逆转和延缓肝纤维化,BMSCs 的临床疗效取决于归巢后干细胞的增殖及分化情况,移植后的干细胞所处的微环境是影响干细胞增殖及分化的关键因素,Notch 信号通路是干细胞增殖、分化的关键信号通路。鳖甲煎丸“活血化瘀、软坚散结”,改善肝脏微环境,为干细胞归巢后提供了生存及转化的关键条件。因此我们推测鳖甲煎丸对肝脏微环境的改善能促进干细胞的分化及增殖。本项目以此为研究切入点,进行鳖甲煎丸干预骨髓干细胞分化的体内、外实验,通过免疫组化法及RT-PCR 法检测ALB、AFP、CK18、Notch-1 表达,并观察肝组织中细胞因子（HGF,EGF,TGF-β1,IL-10）的变化,利用信号通路初步探讨鳖甲煎丸干预移植后BMSCs 微环境,促进BMSCs 移植后增殖、分化的机制。 三、主要论点与论据 干细胞移植后肝硬化患者的近期疗效显著,表现为肝功能明显好转,临床症状改善显著。但远期效果不理想,限制了干细胞的广泛运用。这可能与骨髓转化为肝细胞的自然转化率较低（2%左右）,完成功能转化需要较长时间（3-6 个月）有关,如何促进骨髓细胞向肝细胞分化,并在最短时间里达到最高转化率,使之能够应用于临床是目前学术界关注的热点和难点。研究证实,微环境是影响干细胞的增殖及分化的关键因素,恰恰中医药在改善肝纤维化、改善肝脏微循环方面疗效显著。能否充分发挥中医药的优势,通过中药改善移植后的干细胞生存微环境,促进干细胞向肝细胞分化成为本课题组探索的重点。本课题组前期针对中医药联合干细胞移植抗肝纤维化进行了初步探索,发现活血化瘀中药在影响干细胞归巢及分化方面作用明显,但其机制不明确,是否是因为中药改善了干细胞生存微环境（干细胞巢）,触动了特异的骨髓细胞增殖信号,使其被选择性地扩增并向肝细胞分化？这为我们进一步研究中药作用干细胞奠定了基础,指明了方向。 四、创见与创新 1.成功建立了鳖甲煎丸含药血清诱导 BMSCs 向肝细胞分化的实验方法,并对肝细胞进行了鉴定,发现鳖甲煎丸含药血清联合 HGF 及 FGF 能促进干细胞向肝细胞分化。 2.通过实验首次发现,鳖甲煎丸联合干细胞治疗肝纤维化的能明显改善肝纤维大鼠的肝功能、肝脏病理组织,说明中药能作用于干细胞,可用于治疗肝硬化。 3.首次发现鳖甲煎丸含药血清有促进骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的作用,该成果有望促进中医药在细胞领域占有一席之地。 4.鳖甲煎丸能促进BMSCs 分化为肝样细胞可能与调节BMSCs 的Notch 信号通路中Notch-1 蛋白及Notch1 mRNA 水平有关。 五、社会经济效益 ,存在的问题基于Notch 信号通路及微环境（干细胞巢）探讨中药对干细胞的作用,从分子水平及细胞生物领域去探讨中医药对干细胞的作用机制,开创了中药研究新模式,通过公开发表论文促进成果传播。 六、历年获奖情况 公开发表论文4篇