[01490118]树鼩TOLL样受体家族基因分析及病毒核酸识别相关TOLL样受体研究

1、课题来源与背景 《树鼩Toll 样受体家族基因分析及病毒核酸识别相关Toll样受体研究》是国家自然科学基金2012年地区科学基金项目,项目编号31160190。项目承担单位广西中医学院（2012年3月更名为广西中医药大学）。 树鼩是一种有潜力成为理想病毒感染疾病模型的小型灵长类动物,但目前对于树鼩免疫系统尤其是免疫分子基础的认识非常有限,严重限制了其在病毒性疾病方面的研究和应用。目前对人的Toll样受体（Toll-Like Receptor,TLR）研究发现,TLR可识别病毒,参与机体抗病毒的固有性免疫,同时也是促进适应性免疫应答的关键蛋白。迄今为止,尚无关于树鼩TLR公开的分子信息。本项目针对此问题进行申报。 2、研究目的与意义 该项目根据已知哺乳动物13种TLRs的树鼩同源基因克隆入手,获得树鼩TLR分子信息,填补树鼩TLR基因分子信息的空白;在此基础上制备引物、核酸探针和抗体等研究材料,建立一系列研究技术和方法,选择针对识别病毒核酸类TLR,阐明树鼩识别病毒核酸的TLR类别、蛋白结构、组织表达分布特征及其识别病毒核酸的作用。研究结果将为以后应用病毒感染树鼩动物模型开展病毒识别机制和防治策略研究提供理论依据和技术支持,并将促进树鼩实验动物化进程。 3、主要成果： （1） 理论成果：首次阐明树鼩TLR的种类、数量、基因结构、组织分布及种属特异性情况;阐明树鼩病毒核酸识别相关的TLR蛋白类别、表达及组织分布情况;阐明其识别病毒核酸的作用。 （2） 技术成果：在NIH的GenBank数据库提交发表基因序列记录12条,为树鼩这些基因的功能检测提供物质基础和构建技术平台。 （3） 发表论文：在国内外核心期刊发表研究论文全文9篇（已经见刊 9篇）,其中 SCI收录2篇;综述3篇;国内学术会议文章2篇;专题报告或讲座2人次。 （4） 人才培养：共培养博士研究1名、硕士研究生6名。 4、创见与创新 在国际上首次对树鼩TLR1,10及两个管家基因GAPDH和beta-actin的序列进行了测序及建立了分子及蛋白水平的检测方法,为树鼩这些基因的功能检测提供物质基础和构建技术平台。 5、成果简介： 本研究采用生物信息学、RACE、qRT-PCR、Western Blot、抗体芯片等技术,对树鼩Toll样受体家族进行了初步分析,首次：（1）发现树鼩Toll样受体家族至少包括10个成员,与Toll样受体家族的组成相似;（2）发现树鼩Toll样受体蛋白组成结构与人Toll样受体在进化上亲缘很近,其功能很可能相同：对病毒核酸识别的TLR为TLR3、7、8、9;（3）完成了树鼩管家体基因分子GAPDH和ACTB的基因全长序列测定,建互了这两个分子的qRT-PCR和Western Blot检测方案,（4）发现树鼩TLR8的功能与人相同,受R848刺激后能上调表达。上述结果首次揭示了树鼩TLR家族的基本情况,发现树鼩动物模型在TLR家族研宄上相对于啮齿动物有更大的优势。