一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法,将蚯蚓放置清水中24h,排除体内的粪便,将其储存冰箱中待用;用磷酸缓冲溶液,在冰水浴条件下匀浆,制成匀浆液,离心得粗酶提取液,保存在冰箱中。100μL粗提取液中加入表面活性剂Triton?X-114溶液和柠檬酸缓冲溶液用二次水定容到10mL充分振荡并摇匀。将其上述溶液放置在水浴温度为35℃恒温水槽中平衡9min,而后将离心,分层后下层即为纯化后乙酰胆碱酯酶制品。本发明提供的是蚯蚓血清乙酰胆碱酯酶的纯化萃取方法,其酶来源便宜广泛,并且灵敏度高,制备工艺简单稳定,生产成本低。