[01698701]解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠ALR表达的影响

1、课题来源与背景; 肝衰竭是由多种损伤因素引起的严重肝功能损害,具有发病急、病死率高等特点,在我国主要由肝炎病毒感染所引起。据统计,我国现有约1.2亿病毒携带者,3000万例慢性乙型肝炎患者,每年约有1-3%的肝炎患者将发生或进展为肝衰竭,因此国内肝衰竭的防治工作仍非常艰巨。我国每年死于肝炎及其并发症的患者达数十万人,直接和间接经济损失超过1000亿元人民币。该病已成为严重影响我国人民身心健康和国民经济、社会发展和稳定的重大疾病之一。 自1946年Lucke首次提出暴发性肝炎的概念以来,国内外许多学者对肝衰竭进行了广泛深入的研究。无论是以内科综合支持疗法为主,或是生物人工肝治疗或是进行的肝移植、肝细胞移植治疗肝衰竭,其病死率仍在50%以上。究其主要原因还是由于对肝衰竭的发生机制认识有限,没有能建立起阻止肝炎重症化的有效方法。近年来中医药在拮抗肝衰竭、临床研究等方面取得了令人瞩目的成果。因此,继续探寻肝衰竭的发病机制,并从中医药宝库中挖掘拮抗肝衰竭的特效药物将是今后很长一段时间内该领域的研究热点。 ALR是一种新的肝细胞源性细胞因子,ALR具有疏基氧化酶的作用、诱导线粒体基因表达、提高氧化磷酸化能力和免疫调控功能等生物活性。动物实验已证实ALR可促进肝再生。并且有学者报道,胞外ALR可能与细胞表面特异受体结合经MAKP途径发挥作用,而胞内ALR则通过不依赖琳KP的途径提高JABI磷酸化的能力,调节激活转录因子AP-1活性,激活肝再生相关的瞬时早期反应基因,促进细胞DNA的合成,使细胞从GOG/1期进广西自然科学基金项目结题报告入s期。Hagiya 等提出ALR可能通过肝非实质细胞而发挥作用。肝非实质细胞可分泌多种细胞因子如IL-6、HGF、TGF-a、TGF-p、TNF-a等,参与肝再生的调控。其中,肝脏Kupffer细胞（KC）在肝窦与肝细胞相邻,有可能通过内分泌和旁分泌对肝细胞的增生产生生物学效应。KC是体内最大的巨噬细胞群体,参与免疫反应,激活后可分泌多种细胞因子如IL-6、NTF-a、TGF-p和PG几等参与肝再生的调控。在原代培养的肝细胞中加入肝切除后再生肝KC的24小时条件培养液,发现肝细胞DNA合成显著增强。可以特异性抑制肝NK细胞的活性,激活Kupffer细胞释放细胞因子IL-6和TNF-α、通过分泌IL-10和抑制IL-2分泌而发挥免疫抑制作用以促进肝细胞再生。本研究还证实,本方能通过提高肝线粒体内的NO含量途径来保护肝细胞,并呈现量效关系。 我院中医肝病治疗中心长期致力于中医药防治肝衰竭/重型肝炎的基础与临床研究。对于本病的病因病机的认识,我们在国内率先提出了肝衰竭“毒邪病因”新学说,该学说认为“毒邪为肝衰竭的致病之因,贯穿于疾病的始终,瘀、痰为病变之本,并且毒与瘀、痰又可互为因果”。基于前期临床研究,已证实解毒化瘀Ⅱ方有确切疗效的验方。 2、研究目的与意义; 本研究拟在前期成果基础上,从肝细胞再生角度对肝衰竭“毒邪病因”学说予以进一步深化与完善,以冀进一步提高中医药治疗肝衰竭的临床疗效。 3、主要论点与论据; 3.1 ALR 是一种能够特异性地促进肝细胞再生的因子。ALR 可刺激肝细胞 DNA 的合成, 并可抑制肝中自然杀伤细胞 （NK 细胞）的功能,激活 Kupffer 细胞释放细胞因子 IL-6 和 TNF-α、通过分泌 IL-10和抑制 IL-2 分泌而发挥免疫抑制作用以促进肝细胞再生。 3.2 本课题拟以 D-GalN+LPS 暴发性肝衰竭大鼠模型为研究对象,应用细胞培养、流式细胞仪、RT-PCR、Western blot、免疫组化等技术方法,深入研究解毒化瘀Ⅱ方对肝脏 ALR、Kupffer 细胞、IL-6 和 TNF-α、IL-10 IL-2 表达的影响。旨在阐明解毒化瘀Ⅱ方通过增强 ALR 表达,促进肝再生,拮抗肝衰竭的作用机制,明确解毒化瘀Ⅱ方作用靶点,为中医药防治肝衰竭等重症肝病提供新的思路。 4、创见与创新; 已明确肝衰竭进程中 ALR 表达变化规律和下游 IL-4、IL-10、IL-2 变化情况,证实解毒化瘀Ⅱ方可促进ALR 表达,促进肝细胞再生,同时降低 IL2 和 IL10 的表达,缓解炎性瀑布,研究结果为肝衰竭“毒邪病因”学说及解毒化瘀Ⅱ方治疗急性肝衰竭提供了科学佐证。在研究的思想、方向上均有明显的特色与创新。 5、社会经济效益,存在的问题; 5.1 缩短了肝衰竭的住院天数,减少了患者的医疗费用,直接为政府和患者节省了大量医疗开支,减少了医疗资源的消耗; 5.2 该项目增加了广西中医肝病治疗中心协作网医院（省、市、县三级医院）的临床中药饮片的使用量与需求量,直接带动了广西中药材的发展。 6、历年获奖情况; （1）2016年广西壮族自治区科学技术成果——解毒化瘀法治疗慢性重型肝炎的临床研究（登记号：201696181）; （2）2016年广西壮族自治区科学技术成果——慢性肝炎重症化倾向期证候规律及中西医结合治疗方案研究（登记号：201696182）; （3）2016年广西壮族自治区科学技术成果——解毒化瘀Ⅱ方调控肝衰竭大鼠LPS/TLR4信号途径免疫网络蛋白质组学的研究（登记号：201695600）; （4）2016年广西壮族自治区科学技术成果——解毒化瘀法治疗慢性重型肝炎的临床研究（登记号：201696181）。 7、成果简介要向社会公开,请不要填写商业秘密内容。 7.1 已发表中文核心期刊文章 1 篇,后续实验结果正在投稿中,预计可在中文核心期刊上发表论文 2 篇。 7.2 培养中医药拮抗肝衰竭方向研究生 2 名。