[01778551]解毒化瘀Ⅱ方调控肝衰竭大鼠LPS/TLR4信号途径免疫网络蛋白质组学的研究

肝脏是一个具有独特免疫学特征的器官,在肝脏中含有大量参与天然免疫的吞噬细胞（枯否细胞、树突状细胞）、NK细胞、T 细胞和参与获得性免疫的迁移性 T、B 淋巴细胞,组成一个复杂的免疫网络系统,肝脏非实质细胞引发的过度炎症免疫反应,导致肝细胞大量坏死及凋亡是肝衰竭核心的发病机制之一。Toll 样受体（TLRs）能通过特异性地识别病原相关的分子模式,偶联信号传导,激活天然免疫和获得性免疫系统。最新研究表明,LPS/TLR4 信号途径介导的免疫网络紊乱与肝衰竭有密切关系,肝内KC细胞LPS/TLR4 信号通路过度激活激发的免疫瀑布效应必然参与肝细胞坏死与凋亡进程。 中医药治疗肝衰竭具有悠久的历史,疗效卓著。尤其近代对肝衰竭病因、病机基础研究所获得的巨大进展,使我们认识到本病的核心病机是“热毒内蕴、瘀血内阻”,“毒”为致病之因,贯穿于疾病的始终,“瘀”为病变之本,并且“毒”与“瘀”又可互为因果,形成恶性循环链,最终导致毒瘀胶结难解的局面,因此在治疗上提出了清热解毒、活血化瘀的原则。大量临床研究亦证实,中医采用清热解毒和/或活血化瘀法确能提高本病的临床疗效,并降低患者死亡率等。解毒化瘀颗粒（由茵陈 30g、赤芍 50g、大黄 15g、白花蛇舌草 30g、石菖蒲 15g、郁金 15g 组成）是课题组根据肝衰竭“毒邪病因”学说构建的临床验方,具有清热解毒、活血化瘀之功效。前期临床研究证实本方能减少肝衰竭患者肠源性内毒素的吸收,并降低并发症的发生率,改善预后,提高存活率。 因此,本项目以D-GalN+LPS 构建急性肝衰竭大鼠模型,使用中药解毒化瘀颗粒进行干预治疗,研究发现解毒化瘀颗粒提高急性肝衰竭大鼠 36h 存活率,缓解急性肝损伤,降低大鼠血清 LPS 含量,降低血清促炎因子 TNF-α、TGF-β水平。在肝内成功分离KC细胞后进行基因芯片检测,发现解毒化瘀颗粒在 LPS/TLR4信号通路上调控的靶标基因是 IRKA1,在肝衰竭进程中它能显著抑制该基因转录。进一步构建IRKA1过表达载体,大鼠尾静脉注射转染,证实解毒化瘀颗粒可拮抗过表达 IRKA1 带来的肝细胞凋亡及坏死, 同时对TLR4、TNF-а、P65蛋白和基因的表达均有明显下调效应。 项目的完成为“解毒化瘀法”治疗急性肝衰竭提供了科学依据,并在LPS/TLR4信号通路上明确了解毒化瘀颗粒调控的分子靶点。