[00291580]基因疗法的非病毒载体——质粒 DNA

一、项目简介 基因治疗中最重要的一个环节是选择适当的基因载体(Vector), 以将安装在其上的重组 治疗基因准确运送到靶细胞。用于基因治疗的载体主要有病毒和非病毒两大类,其中病毒载 体研究较多,在使用中一般都需要重新构建,除去其致病性的复制区和感染区,并以治疗基因 去而代之，然后再通过病毒“感染”方式植入疗效基因。 质粒 DNA 作为一种新的非病毒转基因载体，优点是安全可靠、稳定、对外源基因的容 纳量不限、不会引起免疫系统反应及易于生产等; 缺点是基因表达的时间短、转染效率较低 等， 质粒 DNA 作为生物药剂的应用对生产过程及产品质量提出了很高的要求。质粒 DNA 必须达到与其它生物药剂同样的质量标准。所以必须开发出一个可大量生产以降低成本的、 容易控制以及高重复性的生产过程，提纯的产品必须高度均一，不含细菌杂质和有害物质， 所以生产过程中不能添加抗生素以达到提高质粒的稳定性和产率的目的。此外，细胞中的杂 质如 RNA, 蛋白质，脂多糖等必须从产品中分离出去，因为这些物质可能直接引起免疫反 应。 二、项目成熟程度 质粒 DNA 的生产过程可概括为三步：第一步将治疗基因与真核生物促进子(promotor) 一起克隆到原生质载体中，然后再将新的载体转化克隆到合适的宿主细胞如大肠杆菌细胞中。 第二步是在生化反应器中培养带质粒 DNA 的大肠杆菌克隆菌。第三步是从细胞中分离提纯 质粒 DNA 的 ccc 形式。 目前已完成了基因治疗载体 pBR322、pUC19、pUC21、pCMVS2S、pQ51、pUT649、 pUK21CMVß 在大肠杆菌中的克隆，完成了通过高密度培养大肠杆菌大规模生产基因治疗质 粒的工艺，以及分离、提纯质粒和利用毛细管电泳分析质粒质量方法。本项目技术已完全成 熟。 三、应用范围 （1）供科研院校及医院作为实验试剂。 （2）作为生物药物，作为基因治疗的临床应用。 四、投产条件和预期经济效益 目前基因疗法质粒的市场价约为 600 美元/50 微克。利用大肠杆菌表达，经估算，可将 生产成本降低到 100 美元/50 微克以下。因此一旦市场成熟，将具有极大的经济效益。 六、合作方式 技术转让或联合生产，具体合作方式可商议