技术详细介绍
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种犬源单链抗体及其构建方法和应用。本发明通过设计犬抗体可变区简并引物，成功扩增出犬的重链可变区VH和轻链可变区VL基因。在此基础上利用噬菌体展示技术，成功构建犬源单链抗体scFv文库。所构建的scFv单链抗体库具有多样性和足够大的库容量。本发明通过Dot-ELISA方法用犬DEA1.1血型抗原从scFv单链抗体库中筛选到3株能够与犬DEA1.1血型抗原相结合的单链抗体。其中Clone16具有较强的结合特性。根据Clone16基因构建了pET-32a-Clone16重组蛋白进行原核表达，纯化得到的抗体具有结合活性。为制备犬DEA1.1血型鉴定试剂提供了坚实的基础。