[00837733]参芪止疱颗粒对TLRs及其信号转导通路影响的研究

课题来源与背景：生殖器疱疹近30多年来该病的发病率不断上升，其病情反复发作，频繁的治疗给患者带来沉重的经济负担，严重影响了患者的身心健康和生活质量，部分患者可并发严重的抑郁症，极少数患者甚至产生自杀倾向。更重要的是由于其较强烈的传染性和增加艾滋病病毒的感染机率，已经成为中国严重的公共卫生和社会问题，因此针对HSV感染的预防与治疗，日益受到性病工作者及全社会的关注和研究。所以申请国家自然科学基金对其进行进一步的研究。研究目的与意义：目的：阐明TLRs及其信号转导通路在生殖器疱疹发病的免疫学机制，为中医药防治生殖器疱疹提供实验依据；阐明参芪止疱颗粒调控TLRs及其信号转导通路的机理，明确参芪止疱颗粒治疗生殖器疱疹的作用靶点和作用机理；阐明参芪止疱颗粒无血液和肝肾等毒副作用。意义：该项目的完成有助于阐明生殖器疱疹的发病机理，以及从体外细胞培养技术和免疫调控的角度阐明参芪止疱颗粒是否可以通过TLRs的信号传导通路增强先天免疫应答，从而明确参芪止疱颗粒治疗生殖器疱疹的作用靶点，进一步揭示了中药复方“参芪止疱颗粒”治疗生殖器疱疹的疗效机理，为开发治疗生殖器疱疹的中药提供了前期基础研究的科学依据，提升了该领域的中医药研究水平。主要论点与论据：该课题通过体内外实验，进一步明确生殖器疱疹的发病机理，阐明参芪止疱颗粒治疗生殖器疱疹的作用机制。利用人包皮成纤维细胞（HFF）感染2-型单纯疱疹病毒(HSV-2)，用参芪止疱颗粒予以干预，以阿昔洛韦片（ACV）做对照药，采用CPE法和MTT法进行实验。实验发现HSV-2的TCID50为10 4,参芪止疱颗粒对HFF的CC50值大于10mg/ml，表明其对HFF的毒性作用小；在药物直接抗病毒复制实验中，参芪止疱颗粒对感染细胞EC50为0.30mg/ml，TI＞36表明其对HSV-2感染HFF具有一定保护作用;在HSV-2感染HFF的治疗实验中，参芪止疱颗粒EC50值为0.60mg/ml，TI＞25，提示其对病毒感染后复制有一定的抑制作用；其对HSV-2复制的抑制作用时相主要在感染后0h、2h、4h。建立HSV-2感染豚鼠生殖道模型，用参芪止疱颗粒予以干预，以ACV对照药，采用HE染色、电镜技术、RT-PCR，Western Blot等方法对相关指标进行检测。治疗结束时，参芪止疱颗粒组豚鼠阴道内病毒滴度，外阴皮肤症状与阿昔洛韦组比较差异无统计学意义（P＞0.05），各治疗组与模型组比较有统计学意义（P＜0.05）。参芪止疱颗粒组子宫、输卵管、卵巢组织病理及外阴皮肤组织及脊髓神经节超微结构的改变与ACV组类似。IL-2 mRNA和IFN-γmRNA表达上调(P＜0.05)，而IL-6 mRNA和TNF-αRNA、NF-kB mRNA表达下调（P＜0.05）。参芪止疱颗粒组豚鼠给药6h后TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达最强，12h后逐步下降;抑制剂组各时间点TLR4 mRNA，MyD88 mRNA表达最弱，与其他各组差异有统计学意义(P＜0.05)。研究结果表明：参芪止疱颗粒能起到有效抗HSV-2的作用;通过调控IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、NF-κB mRNA的表达,其能减轻HSV-2感染豚鼠子宫、卵巢组织的炎性损害，从而保护机体，达到抗病毒的作用；同时其能有效表达TLR4 mRNA及MyD88mRNA水平，在启动抗病毒的固有免疫反应中起着重要作用。参芪止疱颗粒能够保护机体，达到抗病毒的作用，值得临床推广。创见与创新：从生殖器疱疹感染的人包皮成纤维细胞入手，直接探讨参芪止疱颗粒在人表皮细胞上预防和治疗生殖器疱疹的疗效及其作用机制，突破了以前的应用动物细胞或其它非皮肤细胞的实验模式，能够更加有效证明参芪止疱颗粒在皮肤细胞的疗效和阐明其作用机制和作用靶点；通过体外细胞培养技术和动物实验两条路径探讨参芪止疱颗粒防治生殖器疱疹的疗效及作用机制，突破了以前直接采用动物学的实验方法，能更加科学的证实参芪止疱颗粒的疗效和机制；采用现代先进的分子生物学和免疫学检测方法，证明中医理论指导下的参芪止疱颗粒防治生殖器疱疹的作用机制，为中医药防治生殖器疱疹提供可资借鉴的思路和方法。社会经济效益，存在的问题：社会经济效益：核苷类抗病毒药物是治疗生殖器疱疹的一线药物，治疗周期长，患者难以依从，而且由于一些药物比较昂贵，在费用上患者也难以承受，有一定肾脏毒性作用。而且只能治疗已经激活的病毒，并不能根除潜在的病毒，所以不能控制该病的复发性。该项目旨在探讨参芪止疱颗粒治疗生殖器疱疹的作用机制可能是可以增强先天免疫应答，抵抗HSV-2的感染及复发，而且长期使用无毒副作用，价格低廉，为今后开发治疗生殖器疱疹的中药制剂提供研究基础。存在的问题：实验中课题组采用“参芪止疱颗粒”这个中药复方来治疗生殖器疱疹。但复方的疗效评价机制教为复杂，今后有待进一步通过组方分析，找到确切的与免疫调控、炎症因子表达密切相关的单体成份，以便进一步进行深入机制探究；实验中课题组以HSV-2感染构建细胞与动物模型，虽可模拟生殖器疱疹的疾病模型，为分析HSV-2感染后发病机制及参芪止疱颗粒作用机制提供实验模型，但是否符合生殖器疱疹淫毒夹湿毒致病导致气阴两伤证尚缺乏明确的判断指标。这不仅是该课题研究，同时也是中医药病证实验研究趾亟待解决的关键性问题。历年获奖情况：无。