[00851690]解毒化瘀颗粒对肝衰竭干预后Toll样受体的表达变化研究

课题来源与背景：肝脏是一个具有独特免疫学特征的器官。Toll 样受体（TLRs）能通过特异性地识别病原相关的分子模式，偶联信号传导，激活天然免疫和获得性免疫系统。最新研究表明，内毒素信号途径介导的免疫网络紊乱与肝衰竭有密切关系，从而为从免疫调控角度开展治疗学研究开辟了一条全新的思路。该课题组前期应用解毒化瘀颗粒治疗肝衰竭，获得了降低病死率的满意疗效，并从炎症分子调控探讨了作用机制。但显然单一基因/蛋白的研究很难洞悉该病的免疫网络全貌及中药的药效靶点。蛋白质组学是一种强调将机体作为整体研究的方法学，与中医学整体观念及中药药效的多靶点性相切合。该项目以D-GalN+LPS 复制肝衰竭大鼠模型，采用蛋白质芯片技术，动态观测各组大鼠血清、肝组织中内毒素信号途径免疫网络的蛋白质组学特征，并通过对肝衰竭免疫网络蛋白质谱解析，尝试从整体层面揭示肝衰竭的发病机制及解毒化瘀颗粒的调控靶点。研究目的与意义：应用蛋白质芯片等现代生物技术，从蛋白质表达层面全面解析内毒素信号途径参与肝衰竭发生的分子机制，明确解毒化瘀颗粒的药效靶点，验证肝衰竭与免疫网络失衡的相关性，为临床治疗肝衰竭提供一种新的启迪。 主要论点与论据：在D-GalN+LPS大鼠肝衰竭模型中LPS/TLR2、LPS/TLR4信号途径介导的免疫网络紊乱均与肝衰竭有密切关系，肝衰竭模型大鼠外周血中表现出明显的转氨酶的升高和内毒素血症，而在肝组织则表现为TLR-2、TLR-4的表达，以及TNF-a、IL-2和IL-10表达增高，而解毒化瘀颗粒不同程度上降低TLR-2、TLR-4以及相关细胞因子IL-2和IL-10的表达，而IL-4在肝损伤中无明显变化，且不受中药的影响，说明Toll样受体及相关的细胞因子免疫网络是肝衰竭的重要发病机制及中药解毒化瘀颗粒的调控靶点。创见与创新：该项目的创见与创新之处在于以中医学对肝衰竭 “热毒内蕴、瘀血内阻” 的基本病机的认识及以LPS/TLR4信号途径免疫网络为出发点，应用蛋白质芯片等现代生物技术，系统研究LPS/TLR4信号途径免疫网络蛋白质组学及负调控因子参与肝衰竭形成的机制，从免疫网络调控的新角度全面探讨解毒化瘀Ⅱ方拮抗肝衰竭的作用靶点，为中医药防治肝衰竭等重症肝病提供一种新的思路与方法。在研究的思想、方向上均有明显的特色与创新。社会经济效益，存在的问题：缩短了肝衰竭的住院天数，减少了患者的医疗费用，直接为政府和患者节省了大量医疗开支，减少了医疗资源的消耗，对生态环境和自然资源的保护起到一定的促进作用；该项目增加了广西中医肝病治疗中心协作网医院（省、市、县三级医院）的临床中药饮片的使用量与需求量，直接带动了广西中药材种植、加工、销售产业链的发展，间接促进广西社会和经济发展，使科学技术进步、经济持续发展、环境（生态）日益改善三者有机协调统一，符合生态平衡及生态经济学的需求。应用激光扫描共焦显微镜、流式细胞术及放射受体分析法观察各组大鼠肝脏KC、SEC 上信号受体TLR4、TLR2与LPS 结合、分布的规律以及解毒化瘀颗粒对其调控的模式。 应用RT-PCR 法、免疫组化法观察各组大鼠肝脏中内毒素信号调控分子（TLR4、TLR2、TNF-α）表达及解毒化瘀颗粒的干预作用。应用HE 染色、TUNEL 法、免疫组化对比观察各组肝衰竭大鼠的终末结局：肝细胞坏死、凋亡、再生及大鼠存活率等的差异。